Validation d’une méthode UHPLC/MS-MS pour le dosage plasmatique du 15-F2t-isoprostane, biomarqueur du stress oxydant, en vue de l’établissement de valeurs de référence en routine clinique

Objectif : Cela fait des décennies que l’implication des isoprostanes dans le stress oxydant est mise en évidence dans la littérature. Malgré cela, il y a peu de concordances entre les différentes valeurs de référence publiées dans ces mêmes articles. Cela peut s’expliquer par le très grand nombre de composés apparentés à cette famille de molécules.
L’Unité GLP-AEPT s’est concentrée sur le 15-F2t-isoprostane, biomarqueur « gold standard » de la peroxydation lipidique, afin de développer et valider une méthode de dosage fiable et utilisable en routine clinique. Cette méthode a ensuite été appliquée à l’analyse du plasma prélevé chez 61 volontaires sains en vue de déterminer les valeurs de référence pour ce biomarqueur du stress oxydant.

Méthodes : Les échantillons plasmatiques sont purifiés par extraction liquide-solide avant d’être analysés par chromatographie liquide à ultra haute pression couplée à la spectrométrie de masse en tandem (UHPLC/MS-MS) au moyen du système UPLC Xevo TQ-S (Waters).

Résultats : La méthode a été validée avec succès sur une gamme de concentrations allant de 25 à 2000 pg/ml en appliquant une stratégie basée sur l’erreur totale de mesure (incluant l’expression de la justesse et de la fidélité intermédiaire) et les profils d’exactitude. Les limites d’acceptation ont été fixées à ± 20 % pour les concentrations inférieures à 30 pg/ml et ± 15 % pour les concentrations égales ou supérieures à cette valeur. Cette approche garantit que seules 10 % des futures mesures d’échantillons inconnus seront en dehors de ces limites.
Les concentrations obtenues pour les 61 volontaires sains sont distribuées selon une courbe gaussienne classique. L’intervalle de valeurs de référence pour le 15-F2t-isoprostane a été calculé et est compris entre 152 et 368 pg/ml [1]. Plusieurs corrélations ont ensuite pu être mises en évidence entre ce biomarqueur et d’autres paramètres biologiques connus pour affecter le niveau de stress oxydant de l’organisme (rapport Cu/Zn et glutathion total entre autres) [1].

Conclusion : Une méthode d’analyse fiable et compatible avec une application en routine clinique est à présent disponible afin de mesurer la concentration plasmatique en 15-F2t-isoprostane. Grâce à l’intervalle de valeurs de référence qui a été déterminé pour ce biomarqueur, le niveau de stress oxydant du patient peut être évalué.

Références : 1. Pincemail J. et coll. Validated routine-ready UHPLC/MS-MS method for the reference range determination in human plasma of 15-F2t-isoprostane, biomarker of the oxidative stress. FRBM. 2017; 108 (1): page S42.