Contribution à la mise en place d’une plateforme de transgénèse chez la volaille domestique: culture, cryopréservation et ingénierie génétique de cellules germinales primordiales.

Les cellules germinales primordiales (PGCs) représentent un vecteur de choix pour la transgénèse et l’édition du génome chez la volaille domestique. Elles supportent l'insertion de transgènes de grande taille et, comme précurseurs de la lignée germinale, permettent la transmission de la modification génétique aux générations suivantes. Par ailleurs, vu la difficulté de cryopréserver les spermatozoïdes et, surtout, les ovocytes aviaires, elles représentent un matériel de choix pour la conservation du germoplasme dans ces espèces.
Malgré les avantages évidents de l’utilisation des PGCs, les technologies décrites récemment dans la littérature s’avèrent généralement plus difficiles à mettre en œuvre et moins efficaces qu’attendu. Dans ce contexte, nous avons développé et optimisé certaines d’entre elles en vue de les implémenter dans des projets d’ingénierie complexe du génome de la poule.
Nous nous sommes d'abord attachés à améliorer l'efficacité de la culture et de la cryopréservation des PGCs. En mettant au point une méthode de culture en inserts présentant une efficacité de près de 40 %, nous avons pu isoler et cultiver à long terme des PGCs issues de 3 souches de poules commerciales et de 2 races locales belges en danger d'extinction. Les cellules présentaient toutes les caractéristiques des PGCs en termes de morphologie, d'expression de marqueurs et de capacité de migration vers les gonades. Nous avons également proposé une méthode de cryopréservation par vitrification, qui montre des résultats supérieurs à ceux obtenus par congélation lente classique.
Durant la dernière partie de ce travail, nous avons modifié génétiquement des PGCs pour obtenir des transfectants stables exprimant la GFP. Ces transfectants nous ont permis de vérifier la colonisation gonadique à long terme et la transmission germinale du transgène. Nous avons également testé une méthode de recombinaison site-spécifique par un échange de cassettes médié par la recombinase Cre.
Nous avons ainsi développé le savoir-faire nécessaire pour maîtriser l’isolement, l’expansion, l’ingénierie génétique, la réimplantation et la cryopréservation des PGCs de poule et avons montré la possibilité de transmission germinale d'une lignée cultivée à long terme et génétiquement modifiée.