Etude du mécanisme d’activation du zymogène proDer p 6 de l’acarien Dermatophagoides pteronyssinus et du rôle de son propeptide dans l’inhibition, le repliement et l’immunogénicité de l’allergène

L’allergie aux acariens touche 20 à 30% de la population occidentale. L’allergène Der p 6 de l’acarien Dermatophagoides pteronyssinus est une protéase à sérine active de la famille de la chymotrypsine. Son activité protéase pourrait être impliquée dans l’augmentation de la réponse allergique chez les patients atopiques. Der p 6 est synthétisée chez l’acarien sous la forme d’une pré-pro-protéine constituée d’un peptide signal (17 résidus) et d’un zymogène présentant un propeptide de 34 résidus en amont du domaine protéase de 231 résidus.
Après avoir produit en Pichia pastoris et purifié le zymogène proDer p 6, son mécanisme d’activation a été élucidé dans la première partie de ce travail. Il s’agit d’un mécanisme tout à fait particulier, propre à l’acarien lors duquel la protéase à cystéine active Der p 1 mature proDer p 6. Un mécanisme similaire avait pu être montré pour le trypsinogène proDer p 3. Pour la première fois, la forme recombinante de Der p 6 a pu être produite. Celle-ci présente la même activité que la protéase naturelle présente dans les extraits d’acariens.
Dans la seconde partie de ce travail, Der p 6 ainsi que Der p 1 ont pu être mis en évidence au niveau du tube digestif de l’acarien D. pteronyssinus, ce qui confirme que ces protéases sont impliquées dans la digestion de l’acarien. La protéase Der p 1 est présente au niveau de l’intestin moyen, tandis que Der p 6 est présente dans le gros intestin. Dans cette dernière partie de l’intestin, les protéases sont co-localisées, ce qui indique que le procédé de maturation observé in vitro pourrait se dérouler in vivo.
Dans la troisième partie de ce travail, nous avons montré que le propeptide de proDer p 6 est un inhibiteur spécifique de la protéase Der p 6. Le propeptide est donc impliqué dans le contrôle spatio-temporel de l’activation de la protéase. Lors de ce processus, les quatre résidus en amont du site de clivage (résidus P4 à P1) sont nécessaires et suffisants pour la reconnaissance et le clivage du propeptide par Der p 1. Comme cela a été montré pour Der p 3, aucun rôle du propeptide dans le repliement de la protéase Der p 6 n’a pu être mis en évidence.
Dans la dernière partie, une étude préliminaire de l’allergénicité de Der p 6 a été réalisée. Der p 6 serait un allergène mineur avec une prévalence d’environ 30 %. Les études par ELISA et activation des basophiles, réalisées avec les formes naturelles, recombinantes ou inactives de Der p 6 indiquent que ces différentes formes pourraient être utilisées en diagnostic. Des prédictions bioinformatiques ont également été réalisées afin de déterminer les épitopes B de Der p 6.