Application de la technique RNAi au silençage d’un rapporteur

Le système d’interférence par ARN (RNAi) a été découvert récemment. A la base, il semblerait avoir constitué un mécanisme de défense naturel de l’organisme en réponse à l’expression anormale de gènes, notamment ceux résultants de l’envahissement viral ou de transposons. A l’heure actuelle, il est exploité pour éteindre l’expression d’un gène afin de modifier de manière contrôlée un phénotype.

Ce système est induit par la présence d’ARN double-brin dans la cellule. Cet ARN double-brin est débité en siRNA (short interfering RNA) de 21-23 nucléotides par le complexe Dicer. Ces siRNA seront ensuite incorporés dans un complexe RISC (RNA Induced Silencing Complex) et le guideront vers l’ARNm homologue afin de le dégrader.

Le but de ce travail est de tester, de manière comparative, différentes techniques d’induction du système chez la levure Schizosaccharomyces pombe. Un gène rapporteur ura4 est choisi comme cible du système. Trois vecteurs ont été construits pour induire la production de siRNA homologues de ura4. Un premier vecteur est destiné à produire le transcrit complet du gène ura4 antisens, un deuxième vecteur une "hairpin" de 25 paires de bases et un troisième vecteur une "hairpin" de 350 paires de bases. Ces trois vecteurs, ainsi que des siRNA synthétiques, ont été transformés dans S. pombe afin d’induire le système RNAi. Aucune induction du système n’a été observée. Nous discutons les raisons possibles de cet échec.