Estudio de las interacciones in vitro de las subunidades que componen el brazo periférico de la ATP sintasa mitocondrial de Polytomella sp

La ATP sintasa mitocondrial de las algas clorofíceas no contiene las subunidades clásicas que están involucradas en la formación del cuello lateral (estator) de la enzima y en la dimerización de la misma. En compensación, ha adquirido 9 subunidades novedosas, de origen evolutivo desconocido, que han sido llamadas ASA1 a ASA9. Estas subunidades ASA solamente están presentes en el grupo de las algas clorofíceas y no se encuentran en otras algas cercanamente relacionadas, como las algas verdes del linaje de las ulvofíceas, de las prasinofíceas o de las trebuxiofíceas. Experimentos de disociación de la enzima, tratamiento con agentes entrecruzadores y estudios de microscopía electrónica llevaron a la propuesta de un modelo estructural de esta ATP sintasa, en el cual las subunidades ASA1 a 9 forman la estructura del estator periférico y participan en la dimerización de la enzima (Cano-Estrada et al., 2010). El objetivo de este trabajo es conocer cómo interactúan las subunidades ASA2, ASA4 y ASA7 del brazo periférico de la ATP sintasa mitocondrial de Polytomella sp. La estrategia experimental está basada en la clonación de los genes completos así como de fragmentos de éstos, la sobre-expresión heteróloga en bacteria y su purificación. Con las proteínas purificadas se realizaron ensayos de interacción que comprenden inmunorréplicas tipo far western, geles azules nativos y copurificacion de subcomplejos en columnas de afinidad. Los resultados obtenidos indican una interacción entre las subunidades ASA4 y ASA7 mediada por los extremos carboxilo de ambas proteínas, así como una asociación de las subunidades ASA2 – ASA4 y ASA2 – ASA7.