Aislamiento de algunas subunidades que integran el brazo periférico de la ATP sintasa mitocondrial de Polytomella sp. y estudio de sus interacciones.

La ATP sintasa mitocondrial de las algas clorofíceas ha perdido una serie de subunidades clásicas que están involucradas en la formación del cuello lateral (estator) de la enzima y en la dimerización de la misma. En compensación, ha adquirido 9 subunidades novedosas, de origen evolutivo desconocido, que han sido llamadas ASA1 a ASA9. Estas subunidades ASA solamente están presentes en el grupo de las algas clorofíceas y no se encuentran en otras algas cercanamente relacionadas, como las algas verdes del linaje de las ulvofíceas, de las prasinofíceas o de las trebuxiofíceas. Experimentos de disociación de la enzima y tratamiento con agentes entrecruzadores llevaron a la propuesta de un modelo estructural de esta ATP sintasa, donde se propone que las subunidades ASA1 a 9 participan en la estructura del estator periférico y en la formación de un dímero estable. En el presente trabajo se desea abordar un estudio más detallado de las subunidades ASA, para conocer acerca de las interacciones que establecen entre ellas y como contribuyen a la formación del brazo periférico de la enzima. La estrategia experimental parte de la clonación de los genes de las subunidades en vectores de expresión en bacteria, la sobre-expresión de las subunidades recombinantes, su purificación y ensayos de interacción mediante geles azules nativos e inmunoréplicas tipo Far Western. Los resultados indican una fuerte interacción entre las subunidades ASA4 y ASA7 que involucra el extremo carboxilo terminal de la subunidad ASA4. Los estudios de inmunoréplica indican interacciones entre las subunidades ASA4-ASA7 y ASA4-ASA2.