L'activité de la NADPH oxydase : une nouvelle cible pour la curcumine ?

La NADPH oxydase (Nox2) des neutrophiles (PMNs) est une enzyme multi-protéique responsable de la production d'espèce activées de l'oxygène (ROS) pour la destruction des pathogènes. L'activation excessive des PMNs est souvent associée à des pathologies mortelles chez le cheval, faisant de l'activité de la Nox2 une cible thérapeutique privilégiée. Le premier but de ce travail, a été de développer une méthode appelée "cell-free system" (CSF) pour mesurer l'activité in vitro de la Nox2 équine. Un inconvénient de cette technique sont les interférences possibles entre les inhibiteurs et la sonde utilisée pour la mesure de l'activité. Sur base de notre CFS, nous avons créé l'EquiNox2, un nouvel outil pharmacologique, pour étudier les interactions entre des inhibiteurs et la Nox2 et leurs effets sur l'assemblage et l'activité de l'enzyme. Cette méthode consiste en la mesure in vitro de l'activité de la Nox2 fixée sur un support solide, ce qui permet d'éliminer les inhibiteurs avant la mesure de l'activité et réduit les interférences citées pour le CFS. Le CFS et l'EquiNox2 ont été validés avec le diphénylène iodonium et le Gp91ds-tat, deux inhibiteurs connus de la Nox2 humaine. Le deuxième but de ce travail, était l'étude du NDS27, un complexe de lysinate de curcumine avec l'hydroxypropyl-β-cyclodextrine (HPβCD) sur la réponse oxydante des PMNs. Le NDS27, n'est pas toxique et est capable d'entrer et d'interagir avec les membranes des PMNs et d'inhiber l'activité de la myéloperoxydase, la Nox2 et la PKCδ (un activateur de Nox2) impliquées dans la production de ROS. Nous avons montré en CFS et EquiNox2 que le NDS27 se fixe fortement à la Nox2 pour empêcher son assemblage et que l'HPβCD, l'excipient du NDS27, en plus de solubiliser et transporter la curcumine, augmente l'action de celle-ci sur les activités de la PKC et la Nox2. L'effet modulateur du NDS27 sur l'activation de la Nox2 ouvre des perspectives thérapeutiques pour traitement des pathologies accompagnées de réactions inflammatoires excessives.