ORF9p: a new player in the Varicella-Zoster Virus egress

Le virus de la Varicelle et du Zona (VZV) appartient à la famille des herpesviridae, virus enveloppés de grande taille caractérisés par un génome à ADN. Tout comme les autres membres de sa famille, son cycle viral est complexe et beaucoup dʼétapes doivent encore être élucidées. Parmi les 72 ORFs, lʼORF9 est le plus fortement exprimé au cours de lʼinfection. La protéine codée par ce gène est essentielle pour la réplication du VZV. Elle est conservée parmi les alphaherpesvirus et appartient au tegument du virus. Cependant, jusquʼà présent aucune fonction nʼa été décrite pour lʼORF9p ou pour ses homologues.

Le but principal de notre projet de recherche était de caractériser lʼORF9p avec une attention particulière sur la détermination de son rôle biologique dans lʼinfection. Grâce à une technique de recombinaison homologue en deux étapes, nous avons pu insérer différents mutants de lʼORF9 dans un BAC contenant le génome complet du VZV et analyser les phénotypes des virus correspondants ainsi produits.

Nous avons montré que lʼORF9p est fortement phosphorylée au cours de lʼinfection, principalement par la kinase virale ORF47p qui reconnaît le site consensus 84SEDD87 dans la séquence de cette protéine. Nous avons par ailleurs montré lʼimportance du glutamate en position 85 pour la phosphorylation de lʼORF9p ainsi que pour lʼenveloppement secondaire et la production de particules virales libres complètes. De plus, la région acide 85EDDFEDIDE93 a été identifiée comme importante pour lʼinfectivité virale. Dans un contexte où cette région est délétée, un défaut dʼenveloppement est observé et la glycoprotéine gE, interactant de lʼORF9p, semble sʼaccumuler dans les membranes intracellulaires, suggérant une incapacité de cette glycoprotéine à rejoindre la membrane plasmique. Après un screening par double hybride en levure, nous avons mis en évidence plusieurs partenaires cellulaires de lʼORF9p. Parmi ceux- ci se trouve la protéine AP-1μ1, connue pour être responsable du transport vésiculaire dépendant de la clathrine entre le Trans-Golgi Network et les endosomes. Lʼinteraction avec cette protéine cellulaire a été confirmée dans un contexte infectieux.

Ce travail met donc en évidence pour la première fois lʼimplication de lʼORF9p dans lʼassemblage et la sortie du VZV, en proposant deux modèles : 1) lʼORF9p serait responsable de lʼenvoi de gE à la surface cellulaire via son interaction avec cette glycoprotéine dʼune part et AP-1μ1 dʼautre part ; 2) lʼORF9p serait responsable du processus dʼenveloppement secondaire, nécessaire pour la production de particules virales libres.