Faisabilité de la PCR dans la détection du développement de Toxoplasma gondii en culture cellulaire MRC5.

OBJECTIF
Etudier la faisabilité de la technique PCR pour la détection du développement de Toxoplasma
gondii sur milieu cellulaire à partir des culots et des surnageants de cultures sur fibroblastes
humains MRCS.
METHODES
Les surnageants de culture et les cellules correspondant à différents inoculums sont prélevés
après un délai variant de 24 à 120h. La technique PCR utilisée comporte une extraction à
l'iodure de sodium, l'amplification d'une séquence anonyme TGRI E spécifique de T.gondii
(191 paires de bases) et une révélation après électrophorèse sur gel d'agarose-bromure
d'éthidium en· UV. La positivité des cultures est controlée parallèlement par
immunofluorescence à l'aide d'un anticorps monoclonal antiP30 (Sanofi Pasteur) réalisée sur
les culots cellulaires des mêmes cultures.
RESULTATS
La positivité et la cohérence des résultats erl PCR (positivité de tous les inoculums > plus faible
inoculum donnant un résultat positif), aussi bien à partir des culots cellulaires que des
surnageants, démontrent la faisabilité de la méthode avec en particulier l'absence d'inhibiteur de la Taq polymérase dans le milieu de culture.
CONCLUSION
Le développement des toxoplasmes sur milieu cellulaire peut être détecté par la technique
PCR. La version sur surnageant de culture à l'intérêt de laisser intact les cellules et de
témoigner du développement réel des toxoplasmes.