Evaluation du rôle des RhoGTPases dans la croissance tumorale in vitro et in vivo par les ARN interférentiels

We have contributed to decipher the role and the mechanisms of regulation of several GTPases of the Rho family in tumor growth using RNA interference. First, the technological tools were validated by confirming the role of the small GTPases Rac1 and Cdc42 in the organization of the actin cytoskeleton and focal adhesions in human fibroblasts and in the related mechanical functions. The study of the individual role of RhoA and RhoC in these processes revealed their specific functions as well as a compensatory mechanism between these two proteins. The analysis of the organization of the actin cytoskeleton suggested the existence of a second compensatory process involving RhoB, the third member of the Rho subgroup. The study of the regulation of RhoB by RhoA in breast adenocarcinoma cells highlighted the role of the “inactive” GDP bound form of RhoA in the control of the stability of RhoB through the RhoGTPases dissociation inhibitor, RhoGDIalpha. Furthermore, in vitro and in vivo analysis revealed a role for RhoC, but not RhoA, in the tumorigenesis of prostate adenocarcinoma cells through the downregulation of tumor suppressors and the upregulation of pro-invasive proteins/Nous avons contribué à préciser les mécanismes de régulation et la fonction de plusieurs RhoGTPases impliquées dans la croissance tumorale à l’aide des petits ARN interférentiels. En premier lieu, nous avons validé nos outils technologiques en confirmant, dans les fibroblastes humains, le rôle des petites GTPases Rac1 et Cdc42 dans la régulation du cytosquelette d’actine et des adhésions focales ainsi que dans les fonctions cellulaires qui en découlent. L’étude du rôle individuel de RhoA et RhoC dans ces processus a révélé leurs fonctions spécifiques et mis en évidence un mécanisme de compensation entre ces deux protéines. L’analyse de l’organisation du cytosquelette d’actine nous a suggéré l’existence d’un deuxième processus de compensation impliquant RhoB, le troisième membre du sous-groupe Rho. L’étude de la régulation de RhoB par RhoA dans des cellules d’adénocarcinome mammaire a démontré le rôle de la forme de RhoA liée au GDP, réputée inactive, dans le contrôle de la stabilité de RhoB par l’intermédiaire de l’inhibiteur de dissociation des RhoGTPases, RhoGDIalpha. L’analyse in vitro et in vivo des fonctions respectives de RhoA et RhoC a également permis de conclure que RhoC, mais non RhoA, joue un rôle dans la tumorigenèse des cellules d’adénocarcinome prostatique, par une régulation négative de protéines suppresseur de tumeurs et une régulation positive de protéines pro-invasives.