Abstract :
[en] A large spectrum of more than 2,000 CFTR mutations have been reported, associated with a very diverse clinical phenotype of Cystic Fibrosis (CF). In this work we analyzed the spectrum of CFTR mutations in CF and in CF-related disorders. The project specifically aims at investigating the following points:1) Validation of a new diagnostic screening method xTAG (Luminex; panel of 71 mutations), for routine analysis compared to the INNO-LiPA® (Innogenetics; panel of 36 mutations), used as a reference. Reproducible and concording results were obtained on the Luminex platform from DNA Innogenetics positive samples, using DNA extracted from different biological matrices, including blood samples, blood spots from Guthrie cards, chorionic villi and amniotic fluid. The new panel significantly increases the detection rate for patients of southern European origin.2) Study of frequencies of CFTR mutations in central Argentina in the Santa Fe province, which has never been characterized. A cohort of 83 patients out of an initial local selection of 121 was analysed. The results were combined with those of a previous study of the neighboring Cordoba province, leading to the proposal of a unique panel of 21 CFTR mutations for a first line molecular diagnosis in central Argentina.3) Analysis of the effects of mutations in the PRSS1, CFTR or SPINK1 genes on the severity of sporadic idiopathic pancreatitis. A retrospective cohort of 68 patients carrying mutations in the genes was compared to a paired cohort of age- and sex-matched patients with idiopathic pancreatitis and negative genetic testing. Clinical and morphological characteristics of patients were taken into account in the analysis. Clinical parameters were similar in the two cohorts, except for the age of pancreatic disease onset. A significantly higher occurrence of pancreas cancer was observed in the case group, particularly in patients carrying mutations in the CFTR gene. We therefore suggest that CFTR variants present a risk factor for pancreatic cancer.4) Updating the molecular analysis of the CFTR gene in a cohort of patients with allergic bronchopulmonary aspergillosis syndrome (ABPA). Samples from 18 patients previously analysed using a panel of 13 mutations and reported in a paper published in 2001 were re-analysed in 2010 using complete exon sequencing. Compared to the first analysis, 8 cases were found carrying one CFTR mutation and 4 with two mutations. The study considerably extends previous findings by demonstrating a strong link between ABPA in adults and CFTR mutations. Altogether, these studies contribute to shed new light on the molecular diagnosis of the CFTR gene in CF and in CF-related disorders.--------------------------------------------------------------------------------Un large spectre de plus de 2000 mutations CFTR ont été associées à un phénotype clinique très variable de la mucoviscidose. Dans ce travail, nous avons analysé le spectre des mutations du gène CFTR chez des patients atteints de mucoviscidose et dans les troubles associés à la mucoviscidose. Le projet vise spécifiquement à étudier les points suivants:1) Validation d'une nouvelle méthode de dépistage xTAG (Luminex, panel de 71 mutations), pour l'analyse de routine par rapport à l'INNO-LiPA® (Innogenetics, panel de 36 mutations), utilisé comme référence. Des résultats reproductibles et concordants ont été obtenus sur la plate-forme Luminex à partir d'échantillons ADN Innogenetics positifs utilisant de l'ADN extrait de différentes matrices biologiques, y compris des échantillons de sang, des taches de sang de cartes Guthrie, des villosités chorioniques et du liquide amniotique. Le nouveau panel augmente significativement le taux de détection pour les patients d'origine sud-européenne.2) Etude des fréquences des mutations du CFTR dans le centre de l'Argentine, dans la province de Santa Fe, qui n'a jamais été caractérisée. Une cohorte de 83 patients sur une sélection locale initiale de 121 a été analysée. Les résultats ont été combinés avec ceux d'une étude précédente de la province voisine de Cordoba, aboutissant à la proposition d'un panel unique de 21 mutations du CFTR pour un diagnostic moléculaire de première ligne au centre de l’Argentine.3) Analyse des effets des mutations dans les gènes PRSS1, CFTR ou SPINK1 sur la gravité de la pancréatite idiopathique sporadique. Une cohorte rétrospective de 68 patients porteurs de mutations dans ces gènes a été comparée à une cohorte, pairée pour l'âge et le sexe, de patients atteints de pancréatite idiopathique avec des tests génétiques négatifs. Les caractéristiques cliniques et morphologiques des patients ont été prises en compte dans l'analyse. Les paramètres cliniques étaient similaires dans les deux cohortes, à l'exception de l'âge d'apparition de la maladie pancréatique. Une augmentation significative du cancer du pancréas a été observée dans le groupe des patients porteurs de mutations, en particulier dans le gène CFTR. Nous suggérons donc que les variants de CFTR présentent un facteur de risque pour le cancer du pancréas.4) Mise à jour de l'analyse moléculaire du gène CFTR dans une cohorte de patients porteurs d'un syndrome d'aspergillose bronchopulmonaire allergique (ABPA). Les échantillons de 18 patients précédemment analysés à l'aide d'un panel de 13 mutations et rapportés dans un article publié en 2001 ont été ré-analysés en 2010 en utilisant le séquençage complet des exons. Comparativement à la première analyse, 8 cas ont été trouvés porteurs d'une mutation CFTR et 4 de deux mutations. L'étude a considérablement étendu les résultats précédents en démontrant une forte relation entre ABPA chez les adultes et mutations du CFTR.Au total, ces études contribuent à jeter un éclairage nouveau sur le diagnostic moléculaire du gène CFTR dans les cas de patients atteints de mucoviscidose et de syndromes associés à la mucoviscidose.
