Abstract :
[en] Snakebites are a major problem worldwide. Although it has always existed, the World Health Organisation (WHO) only recognised snakebites as a Neglected Tropical Disease (NTD) in 2017. By the same time, they acknowledged that they have been underestimating the mortality and morbidity caused by snakebites.
Snake Venom (SV) is known for many diverse types of activity as its compounds are complex and numerous. Different protein classes such as Phospholipase A2 (PLA2), Snake Venom Metalloproteinase (SVMPs) and Three-Finger Toxins (3-FTx) compose SV and each of them has complete different properties, targets and mechanisms of action. Some venoms are known for their high cytotoxicity, others for haemotoxicity or even neurotoxicity. Each family, sub-family and genus has its particularities, as evolution has selected the snakes according to their environment and their specific needs. That is why, through the years, various strategy of studying and curing SV have appeared.
In this Thesis, enhanced efforts have been done to study proteolytic venoms. A Size-Exclusion High-Performance Liquid Chromatography (SEC-HPLC) has been performed on different samples of venoms to separate them while doing parallel substrate degradation assays. The aim is to learn more about the proteolytic activity of SV toxins. Substrate degradation assays allows to study the degradation of Extracellular Matrix (ECM) by using in vitro fluorescent compounds like modified collagen and gelatine. Those assays can be done in parallel of the separation using an in-home modified fractioner that collects the eluent after the SEC-HPLC.
Impressive results have emerged, however further improvement can be done to improve the repeatability of the assays. Moreover, inhibitors of specific protein classes and further assays such as egg-yolk micelles degradation assay, showing the disruption of the cellular membrane, have yet to be performed.
[fr] Les morsures de serpents constituent un problème mondial majeur. Bien qu'elles aient toujours existées, elle ne furent reconnues par l'Organisation Mondial de la Santé comme une Maladie Tropicale Négligée uniquement qu'en 2017. En même temps, ils ont reconnu avoir sous-estimé la mortalité et la morbidité causées par les morsures de serpents.
Le venin de serpent est connu pour beaucoup de différents types d'activités puisque ses composants sont très nombreux et complexes. Plusieurs classes de protéines telles que les Phopsholipase A2 (PLA2), les Snake Venom Metalloproteinase (SVMPs) et les Three-Finger Toxins (3-FTx) composent les venins de serpents et chacune d'entre elles ont des propriétés, cibles et mécanismes d'action différents. Certains venins sont connus pour leur haute cytotoxicité, d'autres pour leur hématotoxicité ou encore leur neurotoxicité. Chaque famille, sous-famille ou genre ont leurs particularités, puisque l'évolution a sélectionnés les serpents en fonction de leurs environnements et leurs besoins spécifiques. Tout ceci fait que, au fil du temps, plusieurs stratégies d'étude des venins et la façon de les soigner sont apparues.
Dans cette Thèse, des efforts accrus ont été fait pour étudier les venins protéolytiques. Une chromatographie d'exclusion stérique a été réalisée sur différents échantillons de venins pour les séparer tout en faisant des essais de dégradation de substrats en parallèle. Le but étant d'en apprendre plus sur l'activité protéolytique des toxines du venin de serpent. L'essai de dégradation de substrats permet d'étudier la dégradation de la matrice extracellulaire en utilisant, in vitro, des composés fluorescents tels que de la gélatine et du collagène modifiés. Ces essais peuvent se faire en parallèle de la séparation en utilisant un fractioner, modifié sur place, qui récolte l'éluent après la chromatographie.
De bons résultat sont ressortis, cependant des améliorations peuvent être faites pour améliorer la répétabilité des essais. De plus, des inhibiteurs spécifiques à certaines protéines et d'autres essais tel que l’ « essai de la dégradation des micelles de jaune d’oeuf », qui montre une rupture de la membrane cellulaire, doivent être effectués.
