Clonage de l’herpèsvirus alcélaphin 1 sous forme d’un chromosome artificiel bactérien infectieux

L’herpèsvirus alcélaphin 1 (AlHV-1) est un Gammaherpesvirinae du genre Rhadinovirus ayant pour hôte naturel le gnou (Connochaetes taurinus). Apathogène pour son hôte naturel, ce virus induit par ailleurs une pathologie mortelle lorsqu’il est transmis à un grand nombre d’espèces de ruminants sensibles. Cette pathologie, appelée forme africaine du coryza gangreneux (FACG) est associée à une lymphoprolifération et une destruction des tissus de l’hôte infecté. Pour étudier le rôle de l’AlHV-1 dans la pathogenèse de la FACG, il est nécessaire de pouvoir manipuler le génome viral afin de générer des virus recombinants et révertants pour certains gènes. A ce jour, aucune souche d’AlHV-1 recombinante n’a pu être produite. Cette carence résulte du fait que ce virus est strictement associé aux cellules et qu’il possède la caractéristique de s’atténuer spontanément lors de sa multiplication in vitro. De ce fait, la réalisation de virus mutants se révèle impossible par une approche classique de recombinaison homologue en cellules eucaryotes. Récemment, le développement des technologies de chromosome artificiel bactérien (BAC) a permis de cloner le génome entier de plusieurs gammaherpèsvirus de manière stable en bactérie ainsi que la production rapide de nombreuses souches recombinantes. Dans la présente étude, nous avons cloné le génome entier de la souche C500 de l’AlHV-1 sous forme d’un BAC appelé ci-après BAC-AlHV-1. Les résultats obtenus peuvent se résumer comme suit : (i) le BAC-AlHV-1 permet une propagation stable du génome de l’AlHV-1 en bactérie ; (ii) la transfection du BAC-AlHV-1 en cellules eucaryotes permet de régénérer des particules virales infectieuses ; (iii) la cassette BAC insérée initialement dans le génome de l’AlHV-1 étant flanquée de séquences loxP, la multiplication des virions générés à partir du BAC-AlHV-1 en cellules EBL-Cre (embryonic bovine lung ; exprimant la Cre recombinase) permet l’excision de la cassette BAC ; (iv) enfin, la capacité des virions générés à partir du BAC à induire la FACG en modèle lapin a été démontrée. En conclusion, le clone BAC-AlHV-1 généré dans cette étude va enfin permettre l’étude des rôles des différents gènes de l’AlHV-1 dans la genèse de la FACG.