[es] La F1Fo-ATP sintasa mitocondrial de las algas clorofíceas es un complejo parcialmente embebido en la membrana interna mitocondrial que se purifica como un dímero estable de 1600 kDa. Se encuentra formado por 17 polipéptidos, nueve de los cuales (subunidades Asa1 – Asa9) no se encuentran presentes en las ATP sintasas mitocondriales clásicas y parecen ser exclusivos de este grupo de algas. En particular, las subunidades Asa2, Asa4 y Asa7 parecen formar parte de una sección del brazo periférico de la enzima. En el presente trabajo se sobreexpresaron y purificaron las subunidades Asa2, Asa4, Asa7 y los correspondientes fragmentos amino terminal y carboxilo terminal de las subunidades Asa4 y Asa7, con el fin de realizar estudios de interacción in vitro, empleando técnicas inmunoquímicas, electroforesis azul nativa y cromatografía de afinidad. Se determinó que las subunidades Asa4 y Asa7 interaccionan fuertemente principalmente a través de sus regiones carboxilo terminal. Además, la subunidad Asa2 interacciona con Asa4 y Asa7 así como con la subunidad α en el sector F1. Las 3 subunidades Asa forman un subcomplejo Asa2/Asa4/Asa7 con una estequiometría 1:1:1. La subunidad Asa7 y el extremo carboxilo terminal de Asa4 parecen ser necesarios para la interacción con Asa2. Basados en los resultados se generaron modelos estructurales in silico de las tres subunidades. Se propone un modelo de la vecindad topológica de las tres subunidades (subcomplejo Asa2/Asa4/Asa7) así como de su posición en el brazo periférico de la ATP sintasa del alga.
Disciplines :
Biochemistry, biophysics & molecular biology
Author, co-author :
Miranda Astudillo, Héctor Vicente ; Université de Liège - ULiège > Département des sciences de la vie > Génétique et physiologie des microalgues
Cano-Estrada, Araceli
Vázquez-Acevedo, Miriam
Colina-Tenorio, Lilia
Downy Ruíz-Velasco, Angela
González-Halphen, Diego
Language :
Spanish
Title :
Interaciones de las subunidades Asa2, Asa4 y Asa7 en el brazo periférico de la ATP sintasa mitocondrial del alga incolora Polytomella sp
Publication date :
23 October 2013
Event name :
XVIII Reunión de la Rama de Bioenergética y Biomembranas
Event organizer :
Sociedad Mexicana de Bioquímica
Event place :
Querétaro, Mexico
Event date :
Octuber 20-25, 2013
Commentary :
Mitochondrial F1FO-ATPsynthase of chlorophycean algae is a complex partially embedded in the inner mitochondrial membrane that is isolated as a highly stable dimer of 1600 kDa. It comprises 17 polypeptides, nine of which (subunits Asa1 to 9) are not present in classical mitochondrial ATP synthases and appear to be exclusive of the chlorophycean lineage. In particular, subunits Asa2, Asa4 and Asa7 seem to constitute a section of the peripheral stalk of the enzyme. Here, we over-expressed and purified subunits Asa2, Asa4 and Asa7 and the corresponding amino-terminal and carboxy-terminal halves of Asa4 and Asa7 in order to explore their interactions in vitro, using immunochemical techniques, blue native electrophoresis and affinity chromatography. Asa4 and Asa7 interact strongly, mainly through their carboxy-terminal halves. Asa2 interacts with both Asa7 and Asa4, and also with subunit α in the F1 sector. The three Asa proteins form an Asa2/Asa4/Asa7 subcomplex. The entire Asa7 and the carboxy-terminal half of Asa4 seem to be instrumental in the interaction with Asa2. Based on these results and on computer-generated structural models of the three subunits, we propose a model for the Asa2/Asa4/ Asa7 subcomplex and for its disposition in the peripheral stalk of the algal ATP synthase.
