Etude de la régulation de l'expression de l'opéron ftsW-psr-pbp5 chez Enterococcus hirae

Les entérocoques sont des microorganismes commensaux du tractus digestif de la plupart des animaux mais sont également des pathogènes opportunistes. Lorsque les entérocoques sont associés à une infection, la sélection d’un traitement antibiotique adéquat peut s’avérer difficile. Cela est dû à la résistance, intrinsèque ou acquise, des entérocoques à de nombreux antibiotiques. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à leur résistance intrinsèque aux β-lactamines.
Un des mécanismes de résistance envers ces antibiotiques est la production d’un PBP de faible affinité. Cependant, le facteur responsable de la surproduction de cette protéine chez les souches présentant un niveau de résistance plus élevé n’est pas encore connu. Ce travail avait pour objectif principal de contribuer à une meilleure compréhension du mécanisme moléculaire responsable de la résistance aux β-lactamines et d’établir le rôle de l’opéron ftsWpsr-pbp5 chez Enterococcus hirae.
La première partie de ce travail a été focalisée sur les protéines codées par les gènes ftsW, psr et pbp5. La publication du premier génome d’E. hirae ATCC9790 nous a permis d’identifier et situer dans le génome d’autres gènes codant pour des protéines de la même famille (SEDS pour FtsW, LCP pour Psr, et les autres PBPs pour PBP5). Nous avons produit et purifié ces différentes protéines avec pour visée principale la possibilité d’obtenir des anticorps spécifiques pouvant servir à localiser les protéines au sein de la cellule d’E. hirae. Nous avons établi que la protéine Psr lie le peptidoglycane, se localise avec PBP5 au niveau du site de division et possède des caractéristiques en accord avec une fonction similaire à celle proposée pour d’autres protéines LCP.
La seconde partie du travail était axée sur la sélection et l’étude de nouveaux mutants hyperrésistants aux β-lactamines. L’analyse de leur physiologie, de l’expression du PBP5 et de l’environnement génétique du gène pbp5 chez chacun d’eux a été réalisée. Le séquençage du génome de deux mutants a été effectué afin de pouvoir identifier les mutations présentes permettant leur résistance. Des analyses de la force promotrice des séquences en amont de chaque gène de l’opéron ftsW-psr-pbp5 d’E. hirae ont été menées en utilisant le gène rapporteur de la luciférase de luciole. Ces expériences et les mutations observées chez les mutants, nous ont permis d’identifier des éléments régulateurs qui ont une influence sur l’expression de l’opéron ftsW-psr-pbp5.