Abstract :
[fr] Premier rétrovirus oncogène découvert, le virus T-lymphotrope humain de type 1 (HTLV-1) infecte environ 5 à 10 millions de personnes dans le monde. Il est l’agent étiologique de la leucémie à cellules T de l’adulte (ATL) et d’une maladie neurodégénérative chronique appelée HAM/TSP (HTLV-1 associated myelopathy/Tropical spastic paraparesis).
La protéine Tax d’HTLV-1 interagit avec l’hélicase replicative (Minichromosome maintenance 2-7, MCM2-7), via la partie aminoterminale de la sous-unité MCM3. Cette interaction accélère l’activation des origines de réplication tardives dans les cellules infectées. Étant donné que Tax interagit au niveau des séquences Long Terminal Repeat (LTR) du virus, nous avons formulé l’hypothèse selon laquelle le complexe MCM2-7 y serait également recruté. Par une expérience d’immunoprécipitation de la chromatine, nous avons démontré que MCM2-7 se lie aux LTRs viraux. Cependant, la présence du complexe MCM ne permet pas la réplication de plasmides contenant le LTR viral comme le montre un essai de réplication autonome de plasmide. En revanche, le complexe MCM2-7 active la transcription du virus dans des essais luciférases et dans le contexte d’un provirus complet. L’interférence ARN de MCM2-7 inhibe la transactivation du LTR par Tax dans des lymphocytes. Enfin, l’interférence ARN ciblant MCM3 réduit la transcription virale dans des lignées infectées par HTLV-1.
Cette thèse a donc permis de démontrer que la présence du complexe MCM2-7 au niveau du promoteur viral est impliquée dans la transcription du virus.
[en] First oncogenic retrovirus discovered, the human T-lymphotropic virus type 1
(HTLV-1) infects approximately 5 to 10 millions of individuals worldwide. HTLV-1 is the etiological agent of adult T-cell leukemia and a neurodegenerative disorder called HAM/TSP (HTLV-1 associated myelopathy/Tropical spastic paraparesis).
The HTLV-1 Tax protein interacts with the minichromosome maintenance MCM2-7 helicase, through the amino-terminal part of MCM3. This interaction accelerates firing of late DNA replication origins (ORI) in infected cells. Since Tax acts on the long terminal repeat (LTR), we hypothesized that the MCM2-7 complex could also be recruited to the viral promoter. Using chromatin immunoprecipitation, we show that MCM2-7 indeed interacts with LTR sequences. However, loading of the MCM complex does not fire DNA replication in an autonomous plasmid replication assay. In contrast, MCM2-7 activates viral transcription in luciferase reporter assays and in the context of a proviral clone. Short hairpin RNA interference of MCM2-7 inhibits LTR-driven Tax transactivation in lymphocytes. Finally, siRNAs targeting MCM3 reduce viral transcription in HTLV-1 infected cell lines.
Together, our data thus indicate that the presence of the MCM2-7 complex on the HTLV-1 promoter is involved in viral transcription.
