Recherches sur les chitinases. II. Purification de la chitinase d'un streptomycète, et séparation électrophorétique de principes chitinolytiques distincts
Jeuniaux, Charles
1959 • In Archives Internationales de Physiologie et de Biochimie, 67 (4), p. 597-617
chitinase; chitine; méthode néphélométrique; Glaser et Brown; Berger et Reynolds; Streptomycètes; protéines; peptidases; polysaccharidases; cinétique de l'activité chinolytique; purification; sulfate ammonique; milieux gélifiés; électrophorèse
Abstract :
[fr] L'auteur décrit un )procédé permettant de purifier et de concentrer l'exochitinase d'un strptomycète. Ce procédé consiste essentiellement en une adsorption "en masse" sur chitine colloïdale, suivie de lavage et d'hydrolyse enzymatique de l'adsorbant, puis de deux fractionnements successifs par le sulfate ammonique. L'activité chitinolytique a été vainsi concentrée 70 fois avec un rendement de 27 %. La solution purifiée est homogène à l'ultracentrifugation (poids moléculaire = environ 30 000) et aux tests de solubilité dans les solutions de sulfate ammonique ou d'éthanol. L'électrophorèse en gélose à pH 8.2 permet de séparer, outre une impureté protéique (4.5% de la concentration totale en protéines), tris chitinases distinctes. Ces trois chitinases possèdent des propriétés électrophorétiques légèrement différentes, mais présentent la même activité spécifique ; lorsqu'on les recombine, elles catalysent de façon synergique la lyse des suspensions de chitine. [en] The purification and concentration of the exochitinase of a streptomycete are described. The procedure consists essentially of a "mass" adsorption on colloïdal chitin, followed by washing out and enzymic hydrolysis of the adsorbant, and of two consecutive fractionnations by ammonium sulfate. The chitinolytic activity has been concentrated 70 times, with a yield of 27%. The purified solution is homogeneous in the ultracentrifuge (molecular weight = 30 000) and also during the tests of solubility in ethanol or ammonium sulfate solutions. By electrophoresis at pH 8.2 in agar-agar plates, it has been possible to isolate three different chitinases, besides a small fraction of a non-chitinolytic protein (4.5 %). These three chitinases show slightly different electrophoretic patterns ; they have however the same specific activities, but, when they are recombined, a synergistic effect on chitin hydrolysis is observed.
Disciplines :
Environmental sciences & ecology
Author, co-author :
Jeuniaux, Charles ; Université de Liège - ULiège > Institut Léon Fredericq > Biochimie
Language :
French
Title :
Recherches sur les chitinases. II. Purification de la chitinase d'un streptomycète, et séparation électrophorétique de principes chitinolytiques distincts
Publication date :
1959
Journal title :
Archives Internationales de Physiologie et de Biochimie
