Abstract :
[es] Utilización de p24 recombinante para la optimización de un ELISA para detectar anticuerpos anti-BLV en suero.
Gutierrez, G.; Alvarez, I.; Rodríguez, S. y Trono, K.
Instituto de Virología. CICVyA. INTA Cautelar.
El gen completo que codifica para la proteína mayoritaria de la cápside del Virus de la leucosis bovina (BLV), p24, fue amplificado y clonado en un vector de expresión para E.coli. La proteína p24 recombinante (p24r) expresada fue caracterizada por Western blot utilizando un suero monoclonal y un suero policlonal de referencia, demostrando ser altamente específica y no reconocida por sueros de animales no infectados. La proteína fusionada a un tag de histidina fue purificada y utilizada como antígeno de ELISA para detectar anticuerpos anti-BLV en muestras individuales de suero bovino. La metodología fue optimizada en sus diferentes parámetros de uso como solución bloqueante, temperatura y tiempo de incubación, dilución de suero, fase sólida y sustrato colorimétrico; y se desarrolló a partir de estos resultados un ensayo de ELISA indirecto (ELISAp24r) que fue comparado con la prueba oficial de Inmunodifusión en gel de agar (IDGA) y un ELISA indirecto previamente validado, que utilizan como antígeno BLV completo semi-purificado obtenido de un cultivo celular persistentemente infectado. El ensayo comparativo demostró que de 91 sueros positivos por IDGA, 87 resultaron positivos por ELISAp24r. Asimismo, de un total de 184 sueros negativos por IDGA, 179 resultaron negativos por ELISA recombinante. El análisis comparativo mostró un índice de concordancia muy bueno con la prueba oficial de uso actual (IDGA). El ELISAp24r demostró ser una herramienta útil y fácil de aplicar para el diagnóstico de BLV sobre un gran número de muestras, y además posee una ventaja comparativa económica debido al bajo costo de producción y purificación del antígeno p24r en comparación con la producción del mismo a partir de cultivos celulares.
