Abstract :
[es] IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UN NUEVO ELEMENTO REGULATORIO QUE INVOLUCRA AL FACTOR TRANSCRIPCIONAL E2F-4 EN LA REGIÓN U5 DEL LTR DEL VIRUS DE LA LEUCOSIS BOVINA
S. Rodriguez1, C. Varone2, E. Cánepa2, K. Trono1
1Instituto de Virología, CICVyA. INTA – Castelar. 2Cátedra de Biologia Molecular, Facultad de Ciencias Exactas, UBA. Buenos Aires, Argentina.
El genoma del virus de la leucosis bovina (VLB), como todo retrovirus, presenta en ambos extremos zonas denominadas Long Terminal Repeats (LTRs) de importancia en la regulación de la transcripción. Estas regiones están organizadas en tres zonas llamadas U3, R y U5. La región U3 ha sido ampliamente estudiada y se sabe que contiene los principales sitios que regulan la transcripción viral. Sin embargo, poco se sabe de las regiones R y U5 aunque ha quedado demostrado que ambas zonas contienen asimismo secuencias estimulatorias.
Con el objetivo de identificar y caracterizar nuevos elementos regulatorios, en este trabajo se ha llevado a cabo el estudio de secuencias de las regiones R y U5 del LTR 5´ de BLV. El análisis de patrones de reconocimiento de secuencias consenso para factores de transcripción celulares en estas regiones, reveló la presencia de 2 posibles elementos de unión para E2F, ambos en la zona U5, denominados E2F-A y E2F-B, respectivamente.
Para analizar la capacidad de unión a factores celulares de las secuencias LTRs se llevaron a cabo ensayos de cambio en la movilidad electroforética (EMSA) y supershift utilizando extractos celulares obtenidos a partir de linfocitos bovinos y empleando los oligonucleótidos U51 y U52 como sondas, donde mapean los elementos E2FA y E2FB, respectivamente. Se observó retardo por la formación de complejos ribo-proteicos en ambos casos pero solo en el caso del complejo U51-E2F pudo ser identificado el factor E2F-4 utilizando anticuerpos específicos.
En resumen, estos resultados permiten identificar un nuevo sitio para el factor de transcripción E2F-4 localizado en la región U5 del LTR 5´ de BLV. Este motivo constituye un nuevo elemento regulatorio involucrado en la actividad transcripcional de genes virales y celulares dirigida por los LTRs y podría jugar un rol importante en la replicación viral.
