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Abstract :
[fr] Le Virus de Varicelle et du Zona (VZV) est un -herpesvirus responsable de deux maladies distinctes : la varicelle et le zona. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la protéine Immediate Early 63 (IE63) du VZV. Cette protéine est essentielle pour la réplication virale et critique pour l’établissement de la latence du virus dans les ganglions sensoriels. Lors du cycle lytique, elle présente une localisation majoritairement nucléaire, alors que durant la latence, c’est dans le cytoplasme qu’elle se concentre pour finalement se répartir entre les deux compartiments une fois la réactivation du virus enclenchée. Ses propriétés régulatrices sont sujet à controverse depuis de nombreuses années. Les phénomènes de phosphorylation sont connus pour jouer un rôle clé dans la régulation de l’activité de nombreuses protéines. Dans la première partie de ce travail, nous nous sommes penchés sur la phosphorylation d’IE63 par deux types de kinases cellulaires importantes, la Protéine Kinase AMPc-dépendante (PKA) et les Cycline-dépendante Kinases (Cdks). Nous avons tenté de mettre en évidence l’impact de cette modification post-traductionnelle sur la localisation cellulaire et les propriétés régulatrices d’IE63. Nous avons pu montrer qu’IE63 est phosphorylée par la PKA. Il s’est avéré que cette phosphorylation n’était pas essentielle pour la localisation cellulaire correcte de la protéine, mais bien pour ses propriétés régulatrices. Ensuite, nous avons pu démontrer qu’IE63 est phosphorylée in vitro par la Cdk1 et la Cdk5, et in vivo par la Cdk1. Cette phosphorylation est apparue comme cruciale pour la localisation cellulaire et l’activité régulatrices d’IE63 en cellules Vero.A l’entame de la seconde partie de ce travail, une compréhension des fonctions globales d’IE63 sur l’expression de l’ensemble des gènes cellulaires manquait toujours. Dans ce contexte, nous avons décidé d’examiner les effets d’IE63 sur la transcription de l’ensemble du génome cellulaire par la technique de microarray. Nous avons pu montrer que : (i) en l’absence d’autres protéines virales, IE63 affecte l’expression d’un nombre limité de gènes, incluant des gènes impliqués dans la transduction de signaux, la transcription, la réponse immunitaire et la signalisation des protéines « Heat-Shock ». (ii) L’expression d’IE63 provoque suivant les cas une diminution ou une stimulation de la liaison de la RNA polymérase II sur les promoteurs réprimés et activés par la protéine, respectivement. (iii) En cellules HeLa, la phosphorylation correcte d’IE63 est cruciale pour ses propriétés régulatrices sur les promoteurs endogènes.Des travaux antérieurs émanant de notre laboratoire ont montré qu’IE63 était capable d’inhiber l’expression de certains gènes dépendants du NF-B comme l’IL-8 et l’IL-6. De plus, plusieurs études montrent que le VZV est capable d’échapper au système immunitaire via notamment une répression des gènes dépendant du NF-B. De manière surprenante, l’expression basale de ces gènes n’est pas affectée dans nos conditions, cela étant peut être du à un problème d’accessibilité de leur promoteur lié à l’ouverture de la chromatine. De manière à tester cette hypothèse, nous avons mesuré l’influence d’IE63 sur l’expression de certains de ces gènes (IL-8, IL-6, ICAM-1 et IB) après un traitement des cellules au TNF, une cytokine proinflammatoire connue pour provoquer l’ouverture de la chromatine au niveau du promoteur de nombreux gènes. Les résultats intéressants obtenus lors de ce travail sont : (i) dans des cellules stimulées au TNF, l’expression de certains gènes dépendant du NF-B est affectée par IE63 d’une manière dépendante du promoteur étudié, (ii) le niveau de phosphorylation de la protéine influence ces propriétés régulatrices, (iii) l’effet d’IE63 est corrélé à une modification de l’ouverture de la chromatine et enfin, (iv) IE63 est capable de modifier la liaison du NF-B sur les promoteurs testés.
