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Abstract :
[en] This thesis is divided in two parts. The first research project concerns the functional implication of the alternative splicing that modifies the sequence of the VEGF-A mRNA and leads to the synthesis of several VEGF-A proteins possessing specific properties. Ten VEGF-A isoforms, differing by their composition in the domains encoded by exons 5 to 8, have been produced and systematically compared in several in vitro and in vivo complementary models. New functions of the exon 5-derived amino acid sequence and a better understanding of the cooperation between different domains have been determined during this study. The isoform 111 of VEGF-A (VEGF111) is composed of the amino acids encoded by exons 1-4 and 8a. Since it has specific properties, such as a high capacity to diffuse and an increased resistance to proteases, it was evaluated as a candidate molecule for the treatment of tendon lesions. In a rat model of tendon rupture, VEGF111 injection leads to a faster recovery of the tensile strength of the healing tendon. Further characterizations evaluating different dosage and chronicity of injections and comparing the efficiency of other VEGF-A isoforms are however required to confirm these promising data.The second part of the work consists in the characterization of the various functions of ADAMTS3 in vivo. Mice with only one functional Adamts3 gene (Adamts3+/-) are viable and fertile but their crossing did not produce any Adamts3-/- pups because of embryonic lethality around E15.0 (embryonic day 15). Defects in the processing of fibrillar procollagens, its only known substrates up to now, does not seem to be modified. The most obvious phenotype of dying embryos was skin edema but other potential defects were also analyzed. Confirmatory studies were further realized in the model of zebrafish development after injection of adamts3-specific morpholinos in fertilized eggs. Preliminary data concerning potential new substrates of ADAMTS3 are also provided.________________________________________________________________________________Cette thèse comporte deux parties. Le premier projet de recherche concerne les implications fonctionnelles de l’épissage alternatif qui modifie la séquence de l’ARNm du VEGF-A et induit ainsi la synthèse de plusieurs variants de VEGF-A possédant des propriétés spécifiques. Dix isoformes de VEGF-A, se différenciant par la composition des domaines codés par les exons 5 à 8, ont été produites et comparées systématiquement dans des modèles complémentaires in vivo et in vitro. De nouvelles fonctions du domaine issu de l’exon 5 ainsi qu’une meilleure compréhension de la coopération entre les différents domaines carboxy-terminaux ont été mis en évidence durant cette étude. L’isoforme 111 du VEGF-A (VEGF111) est composé des acides aminés codés par les exons 1 à 4 et 8a. En raison de ses propriétés spécifiques, comme sa grande diffusibilité et sa résistance accrue aux protéases, cette isoforme a été évaluée comme candidat pour le traitement des lésions tendineuses. Dans un modèle de rupture de tendon d’Achille chez le rat, l’injection de VEGF111 permet une récupération plus rapide de la résistance à la traction du tendon en cours de réparation. Des caractérisations visant à évaluer les doses et la chronicité des injections, ainsi que des études comparatives mesurant l’efficacité d’autres isoformes de VEGF-A seront nécessaires afin de confirmer ces résultats prometteurs.La seconde partie du travail concerne la caractérisation des fonctions de l’ADAMTS3 in vivo. Des souris possédant un seul gène fonctionnel d’Adamts3 (Adamt3+/-) sont viables et fertiles. Leur croisement n’a pas mené à la naissance de souriceaux Adamts3-/- en raison d’une létalité embryonnaire observée vers E15 (15 jours après l’accouplement). Aucun défaut de maturation des collagènes fibrillaires, seuls substrats connus à ce jour, n’a été observé. Le phénotype principal observé dans les embryons peu avant leur mort est un œdème de la peau, mais d’autres défauts potentiels ont aussi été analysés. Des études de confirmation ont également été réalisées dans un modèle évaluant le développement de poissons lorsque les « morpholinos » inhibent la synthèse d’adamts3 sont injectés dans l’œuf fécondé. Des données préliminaires concernant de nouveaux substrats potentiels de l’ADAMTS3 sont aussi fournies.
