Mise au point d’une technique rapide de dosage de composés phénoliques halogénés dans le sérum par GC/MS.

Introduction :
Ces dernières décennies, la prévalence de certaines maladies avec une composante endocrinienne comme certains cancers hormono-dépendants, le diabète, les maladies thyroïdiennes ou l’infertilité, a augmenté à une vitesse inquiétante. Cette augmentation importante ne peut s’expliquer uniquement par des changements génétiques ou des changements au niveau du mode de vie de l’être humain. L’implication dans cette situation, de la pollution croissante de notre environnement par diverses substances chimiques semble être une des hypothèses les plus plausibles. En effet, parmi ces substances chimiques, certaines sont considérées comme des perturbateurs endocriniens, c’est-à-dire des substances capables d’interférer avec le système hormonal d’un organisme au point d’altérer son bon fonctionnement, ou même celui de sa descendance. Dans cette grande famille des perturbateurs endocriniens qui peuvent se subdiviser en polluants à longue rémanence et polluants à faible rémanence, nous avons choisi de nous intéresser aux composés phénoliques halogénés qui se démarquent des autres perturbateurs endocriniens organohalogénés par un mode d’action qui leur est propre et demandent, par ailleurs, la mise au point d’une méthode analytique particulière.
Matériel et méthodes :
L’analyse se fait à partir de 1 ml de sérum. Ce sérum est d’abord soumis à une extraction en phase solide sur des cartouches d’échanges anioniques de type Waters OASIS MAX (3 ml, 60 mg). L’éluat est ensuite extrait en phase liquide à l’aide d’hexane. Avant d’être analysé par chromatographie gazeuse, les composés phénoliques doivent être méthylés par du trimethylsilyldiazométhane pour améliorer leur comportement chromatographique. L’échantillon est ensuite injecté dans le chromatographe en phase gazeuse Agilent 7890A et la séparation s’effectue dans une colonne Agilent HP-5MS (30m x 0.25mm, 0.25µm) avec un gradient de température et de l’hélium utilisé comme gaz vecteur. Le spectromètre de masse Agilent Triple Quad 7000A permet l’analyse des composés en mesurant le signal de deux transitions pour chacun de ces composés. Pour réaliser la validation analytique de cette méthode nous avons utilisé le logiciel e-noval (Arlenda) suivant les critères de validation ISO 17015.
Résultats :
La méthode développée est satisfaisante pour 15composés phénoliques halogénés, avec des limites de quantification qui varient de 2 à 6.35 pg/ml suivant la molécule, et une excellente reproductibilité. Initialement testée également pour le 2,4,6-tribromophénol et le pentabromophénol, la méthode semble ne pas leur convenir :la LOQ obtenue pour le 2,4,6-tribromophénol est élevée (48 pg/ml) et n’est pas acceptable pour une étude en population générale ; la linéarité n’est pas garantie pour le dosage du pentabromophénol. Ces deux substances seront donc provisoirement exclues de la méthode de dosage.
Conclusion :
La technique nous permet donc de mesurer la concentration de 15 polluants dans le sérum à des taux proches de ceux habituellement rencontrés dans la population générale. Cette méthode sera prochainement appliquée à un échantillon d’individus issus de la population de la province de Liège afin d’en comparer les niveaux de contamination à ceux décrits dans la littérature.