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STUDIO in vitro DEI PARAMETRI DI COINFEZIONE E SUPERINFEZIONE CHE INFLUENZANO LA RICOMBINAZIONE NEI NOROVIRUS
Di Felice, Elisabetta; Ceci, Chiara; Zonta, William et al.
2014V Workshop Nazionale di Virologia Veterinaria
 

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Abstract :
[en] I norovirus (NoV) sono piccoli virus (38-40 nm) a RNA monocatenario sprovvisti di envelope appartenenti alla famiglia Caliciviridae. I NoV attualmente vengono riconosciuti come una delle più importanti cause di gastroenterite acute di origine non batterica nell'uomo coinvolgendo tutte le classi di età e soprattutto contesti comunitari. I meccanismi molecolari che influenzano l'evoluzione dei NoV sono l'accumulo di mutazioni puntiformi e la ricombinazione. L’obiettivo sarà quello di dimostrare che la ricombinazione è un evento che può essere influenzabile dall’impiego di diversi parametri di coinfezione/superinfezione. In letteratura, gli studi sugli eventi ricombinanti che caratterizzano i NoV umani risultano piuttosto limitati a causa dell'assenza di un substrato cellulare che ne permetta la replicazione in vitro. Nel presente lavoro è stato sviluppato un modello sperimentale basato sull’impiego dell’unico NoV, il norovirus murino (MNV), in grado di replicare su substrato cellulare. A tal fine monostrati di cellule RAW264.7 sono stati coinfettati e superinfettati con due ceppi di MNV (CW1 e WU20) utilizzando diversi indici di molteplicità (MOI) e differenti tempi di infezione. I surnatanti sono stati collezionati a 24 e 48 ore post-infezione e quindi sottoposti a metodo delle placche. All’interno della popolazione virale risultante da tale coinfezione/superinfezione, 36 cloni per ciascuna condizione sono stati selezionati e purificati dalle placche e, successivamente, utilizzati per infettare nuovi monostrati cellulari di RAW264.7. Il monitoraggio degli eventi ricombinanti è stato eseguito mediante PCR e Real-Time PCR dopo estrazione dell'RNA virale e retrotrascrizione, impiegando due set di primer in grado di amplificare le regioni site all’estremità iniziale di ORF1 e all’estremità terminale di ORF3. I risultati che permetteranno di quantificare la distribuzione dei ceppi presenti nel surnatante della superinfezione, sono ancora in corso di analisi.
Disciplines :
Veterinary medicine & animal health
Author, co-author :
Di Felice, Elisabetta;  Universita degli studi di Teramo, Facolta di Medicina Veterinaria
Ceci, Chiara;  Universita degli studi di Teramo, Facolta di Medicina Veterinaria
Zonta, William ;  Université de Liège - ULiège > Département des maladies infectieuses et parasitaires (DMI) > Virologie vétérinaire et maladies virales animales
Ferreira de Oliveira-Filho, Edmilson;  Université de Liège - ULiège > Maladies infectieuses et parasitaires > virologie vétérinaire
Di Martino, Barbara;  Universita degli studi di Teramo, Facolta di Medicina Veterinaria
Marsilio, Fulvio;  Universita degli studi di Teramo, Facolta di Medicina Veterinaria
Mauroy, Axel ;  Université de Liège - ULiège > Département des maladies infectieuses et parasitaires (DMI) > Virologie vétérinaire et maladies virales animales
Thiry, Etienne ;  Université de Liège - ULiège > Département des maladies infectieuses et parasitaires (DMI) > Virologie vétérinaire et maladies virales animales
Language :
Italian
Title :
STUDIO in vitro DEI PARAMETRI DI COINFEZIONE E SUPERINFEZIONE CHE INFLUENZANO LA RICOMBINAZIONE NEI NOROVIRUS
Publication date :
June 2014
Event name :
V Workshop Nazionale di Virologia Veterinaria
Event place :
Teramo, Italy
Event date :
26 juin au 27 juin 2014
Available on ORBi :
since 14 August 2014

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81 (3 by ULiège)
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